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液相色谱柱的选择
编辑:网站管理员   点击:897   时间:2017/5/25

液相色谱柱决定最终分离效果,所以在选择色谱柱时候有必要考虑清楚自己的需求。 首先液相色谱柱目前来说分为正反相色谱柱,正相有SI等,反相有C18等。正相主要分离极性物质,反相主要分离非极性物质,氨基柱等主要分离二者之间的。 明确了色谱柱大概功能之后,确认下自己样品信息,基本就有点眉目了,方向对了,剩下的事情就是细节了如:键合相、粒径、孔径、碳载量等 键合相:确定了正反相后基本就简单了,正相很简单,我们重点讨论下反相,C18主要分离非极性和弱极性物质,因为是键合硅胶,所以C18也分好几种有常规的如C18-A,耐纯水的OL Apple C18-AQ、耐酸碱的OL Apple C18-EX等,如果发现C18保留很弱,调整流动相也不行,这个时候可以考虑C8甚至C4等。 粒径:色谱法追求的是高效、高分辨、高速等。目前来说亚2um填料或者2UM核壳填料是很理想的模型,基本具备三高特征尤其是高速,线速度不在影响分离度,不过附带的缺点就是高压,要升级相应的硬件,成本高昂,需要谨慎考虑。 5um填料最普遍,目前来说完全可以胜任各种日常检测,即使有特殊要求,3um色谱填料基本上也能全覆盖,不过该模型下线速度和分离度是成反比的。 孔径:目前很多60~300A都有,甚至更高或者更低的。开孔的填料多了个类似分子筛功能,所以选择孔径一定要关注分子量,蛋白(分子量5000以上)一般都需要在160A以上,多肽(分子量上限在3000左右)在120A左右,一般快速柱孔径都很小,可以缩短样品路径。所以国际上还有无孔硅胶柱子,也很适合蛋白分离,彻底解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。 碳载量:快速柱碳载量很低,如A家等,省时间,省溶剂,但分析部分复杂样品如中药等有点力不从心,这个时候可以考虑英国OL Apple色谱柱,碳载量15~23%,碳载量数值就像河床的水草,越高代表越密集,保留样品能力越强,越有可能分离开难分离物质。



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