摘要：生物总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。
目的建立二丁颗粒中总黄酮的含量测定。方法色谱柱为KromasilC18；以甲醇水醋酸（45∶53∶2）为流动相；检测波长359nm；外标法定量。结果总黄酮在0.0528～0.3168μg/μl范围内呈良好的线性关系，Y=16714X-82.436，r=0.9994，平均回收率为96.19%，RSD=1.2%，（n=6）。结论所用方法简便、灵敏、准确，可用于二丁颗粒的质量控制。
二丁颗粒是由紫花地丁、蒲公英、板蓝根、半边莲4味药材组成的中药复方制剂，具有清热解毒、利湿、退黄的功能。用于热疖痈毒、咽喉肿痛、风热火眼、湿热黄疸等的治疗。收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部［1］。测定采用HPLC法，以芦丁为对照品，对二丁颗粒中蒲公英的总黄酮进行了含量测定。方法简便，重现性较好。
1仪器与试药1.1仪器日本高效液相色谱系统（日本HITACHI系列）；UV757紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；KQ-100A型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；XS205DU电子天平（梅特勒-托利多）。
1.2试药芦丁对照品（中国生物制品检定所）；二丁颗粒由修正药业集团股份有限公司提供，20g/袋，（批号：051005，053006，054003）；空白对照药材购于东北大药房锦州分店；甲醇：一级色谱纯（天津市登峰化学试剂厂），水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为KromasilC18（5μm，4.6mm×250mm）；流动相为甲醇水醋酸（45∶53∶2）；流速：0.8ml/min；检测波长359nm；进样10μl；柱温30℃；室温操作。精密称取芦丁对照品0.1mg，用甲醇稀释，温热溶解，并用甲醇定容至50ml容量瓶中，摇匀，使用UV757紫外分光光度计在200～500nm范围内扫描，测得芦丁在254nm，359nm处有两个吸收峰，由于254nm杂质峰较大，而359nm则较小，且易分离，故选择检测波长为359nm。
2.2对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品13.2mg，置25ml容量瓶中，加甲醇温热溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
2.3供试品溶液的制备取二丁颗粒样品，研细，精密称定10.0g，置100ml具塞碘量瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30min。放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液作为供试品溶液。取去蒲公英药材的二丁颗粒样品，同法制备空白对照液。取上述溶液5.0ml置25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。按上述色谱条件绘制三溶液的色谱图见图1～3。
2.4线性关系考察精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml，置10ml容量瓶中加甲醇定容至刻度，摇匀，用液相色谱仪测定，进样10μl，以进样量与峰面积计算得回归方程：Y=16714X-82.436，r=0.9994，表明总黄酮在0.0528～0.3168μg范围内线性良好。
2.5精密度考察精密量取芦丁对照品溶液（528μg·ml-1）10μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定，各次峰面积积分值的RSD=0.85%。
2.6重复性实验取同一批号样品（051005）5份，分别进行供试品溶液的制备，测定，同时取对照品溶液10μl进样测定，按外标法计算含量，RSD=1.15%。
2.7加样回收率实验取已知含量的样品（批号：051005）内容物10g，精密称定，精密加入10ml芦丁对照品溶液（0.528mg·ml-1），按照供试品溶液制备项下的制备方法，依法测定，计算回收率。结果见表1。表1回收率测定结果（略）
2.8样品的含量测定精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算，测定结果见表2［2］。表2样品含量测定结果（略）
3讨论芦丁的甲醇溶液经紫外分光光度计扫描，在254nm，359nm处有两个最大吸收峰，由于254nm杂质峰较大，而359nm处则较小，且易分离，故选359nm作为检测波长。
色谱条件在流动相的选择过程中，选择甲醇与水适量比例，反复实验，使杂质峰与所测物质峰充分分离，加入适量酸，达到最佳分离效果，定量更准确。
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